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可溶性酸性轉化酶試劑盒

更新時間:2025-04-02      瀏覽次數:545


可溶性酸性轉化酶(Soluble acid invertase, S-AI試劑盒說明書

分光光度法 50 /24 

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

蔗糖轉化酶(InvertaseIvr催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代謝關鍵酶之一。根據最適 pHIvr 分為酸性轉化酶(AI)和中性轉化酶(NI兩種類型。

AI 的最適pH  35AI 分為可溶性AI(S-AI)和細胞壁不溶性AIB-AI)兩種類型。S-AI 主要存在于細胞液泡或自由空間中,最適 pH  4.5~5.0(酸性),通過降解液泡中蔗糖,調節液泡中蔗糖的利用和果實內糖類的積累。

測定原理:

S-AI 催化蔗糖降解產生還原糖,進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物,在 510nm有特征光吸收,在一定范圍內 510nm 光吸收增加速率與S-AI 活性成正比。

組成:

 

產品名稱

BN6011-50T/24S

Storage

提取液:液體

50ml

4℃

試劑一:液體

50ml

4℃

試劑二:粉劑

1

4℃

試劑三:液體

30ml

4℃

說明書

一份

試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 25ml 試劑一充分溶解備用;用不完的試劑 4℃保存;

自備儀器和用品:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取提取:

按照組織質量(g):提取液體積(ml) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 提取液),進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟和加樣表:

 

試劑名稱μl

測定管

對照管

樣本

200

200



試劑一


800


試劑二

800


混勻, 37℃準確水浴 30min 后,95℃水浴 10min(蓋緊,以防水分散失),流水冷卻后充分混勻(以保證濃度不變)

試劑三

500

500

混勻,95℃水浴 10min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻, 510nm 處,蒸餾水調零,記錄各管吸光值 A,如果吸光值大于 2,可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式中乘以相應稀釋倍數)ΔA=A 測定-A 對照

S-AI 活性計算:

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001x 為標準品濃度(μg/ml),y 為吸光值。

(1) 按蛋白濃度計算:

單位的定義:37℃mg 蛋白每分鐘產生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位。

S-AI 活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

(2) 按鮮重計算:

單位的定義:37℃g 組織每分鐘產生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位。

S-AI 活性(μg/min/g 鮮重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =20.8×(ΔA +0.001) ÷W

V1:加入反應體系中樣本體積,0.2mlV2:加入提取液體積,1mlT:反應時間,30min Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mlW:樣本鮮重,g


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